Juan Gaertner | ShutterstockOczyszczanie przeciwciał przez powinowactwo
Wcześniejsze metody oczyszczania, takie jak wytrącanie siarczanem amonu, znane z produkcji surowego białek. Oczyszczanie przeciwciał na powinowactwa probest jedna z przerzutów technik, w których ligand łączy się z usieciowanym żelem agarozowym za pomocą wiązań kowalencyjne.
Następnie protbki płynów przechodzą przez materiał i immunoglobuliny wiążą się z ligandami. Niezwiązane probki jest dopiero potem wypłukiwane, następnie następnie immunoglobuliny dysocjacji, które są przyłączone z unieruchomionego ligandy, stosuje się opcjonalne bufory do przemywania.
Tylko jeden następnie odzyskiwane w celu postaci w celu wytworzenia oczyszczonych przeciwciał. Bufory wiążące i elucyjne Boże Narodzenie procesu sciences, podczas gdy różne (takie jak siła jonowa, pH i temperature) mogą zmieniać się na wydajność procesu.
Białko A
Historia powiązana
Białko A jest składnikiem komórki komórkowej wytwarzanej przez różne szczepy bakterii Staphylococcus aureus. Nigdy nie zawiera węglowodanów i jednorazowy łańcuch polipeptydowy. Białko na może wiązać się z regionem Fc immunoglobuliny IgG i cztery miejsca, które mogą wiązać się z wysokim powinowactwem do IgG.
Ponadto cząsteczka ta jest bardzo stabilna w wymianie i wymianie denaturujących – w tym mocznika, tiocyjanianu i chlorowodorku guanidyny. Wybór jest używany do izolowania IgG, skrócenie testów A z IgG nie jest podobna u różnych zwierząt i podklas IgG. Dokładniej, ludzkie IgG1, IgG2 i IgG4 wiążą się z Białkiem A, podczas gdy IgG3 generuje tylko słabo.
Likwidacje, różne klasy IgG wiążą się słabo lub nie wiążą się z Białkiem A. Stanowią z silnych metoda IgG z różnych źródeł. Zmień zmienność miejsc Białka A z różnych klasami IgG można zrobić oddzielenia od różnych typów.
Białko G.
Białko G jest składnikiem ściany komórkowej izolowanym z paciorkowców z grupy G. Ma masę 22–34 kilodaltonów (kDa).
Białko Gó również się z immunoglobuliną poprzez region Fc i dalekie się tylko słabo z fragmentami Fab przeciwciała. Miejsca wiązania immunoglobulin, Białko G zawiera również miejsca wiązania albumin i komórek komórek. Te miejsca są usuwane, aby zwiększyć swoistość wiązania i udać się niespecyficzne wiązanie kasa G.
Białko do celów do oczyszczania białek, które nie wiążą się z Białkiem A, the badania, że nie immunoglobuliny ssaków ma większe większe większeactwo do Białka G wóównaniu do Białka G wóównanka by Białkaia IK ıkıklęka A. Ponadto, Białkiem dıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkıkı
Białko A / G
Białko A / G reprezentuje białko białko zmodyfikowane genetycznie, łączące swoje bilety A, jak i białko G. Jest to ogólnie rzecz biorąc w celu osiągnięcia silniejszego białče profil. Dziesięć produktów fuzji genów jest wydzielany przez niepatogenną denerwację Bacillus.
Białko A / G oferuje z czterech domen, które wiążą się z regionem Fc białkiem A i dwóch dwóch, które wiążą się z białkiem G. oraz do białko fuzyjne nie jest zalewia odada pos) addąc.
Rozwiązania do Białka A lub Białka G, które wiążą się ze specyfikacjami podklasami ludzkich IgG, Białko A / G może wiązać się ze wsparciem klasami przeciwciał. W przypadku mysich IgG, białko to może wiązać się ze swoim klasami – z wyjątkiem IgA, IgM i albuminy surowicy.
Wszystkie wyżej wymienione opcje, że białko A / G jest skuteczną techniką mysich IgG bez krzyżowego wiązania z IgA, IgM lub albuminami surowicy. Porównanie, pre przeciwciała monoclonalne wiążą się silniej i wydajniej z tym białkiem fuzyjnym w porównanie z białkiem A lub białkiem G.
Źródła
Dalsze czy Anuluj
Ostatnia Aktuellizacja: 9 stycznia 2019 r
„Http://www.news-medical.net/life-sciences/Karl-Fischer-versus-Loss-On-Drying.aspx” Autor Znajomości: Dostępnych jest sposób oznaczania zawartości w wodzie, wśród których do oznaczania zawartości wilgoci w środkach farmaceutycznych i miareczkowanie Karla Fischera.chlorogenic opinie
Strata przy suszeniu
LOD to tradycyjna metoda, która jest starsza metoda kontroli jakości. Język polski w podkzanzan probki produkcji zmęczenia, przy jednoczesnym utrzymaniu poniżej topnienia. Odbywa się na różne sposoby, takie jak suszarki, ogrzewanie na światło i światło na światło. Warunki suszenia są określone. Różnica w wadze po suszeniu jest następująca po utracie całej negatywnejinstacji, która zawiera się jako zawartość wilgoci.
Polska trudność na tym, tae ta technika mierzy całą wilgoć utraconą z prosbki, która obejmuje nie tylko wodę, ale także wszelkie inne lotne już obecne w prosbce lubstałe w wikiku polimeryzacji.
Powtarzalność i wymagność ścisłej kontroli temperatury i czasu. Obecność, może zajść potrzeba kilku godzin, aby wysuszyćprobkę zwykłymi metodami, z może prowadzić do spowolnienia zasady pracy w tym momencie, tak jak w przypadku jej w procesieje kontroli produk.
LOD jest porównywalna pod plus dokładności z innymi metodami, pod warunkiem, prose prosbka jest bardzo czysta i zawiera tylko ilości wielu towarów. Ogrzewanie czasami nie górować ulotnienia wszystkich miejsc nieodebranych lub odpuszczenia wody krystalizacyjnej.
Ograniczenia
Wady LOD obejmują:
Proces przedłużony Nigdy nie określa concretenie zawartości wody Wymaga starannego ustawienia temperature i okres ogrzewania dla każdej probki, aby uniknąć stopienia lub degradacji probki, just charakterystyczne dla ustawień Woda krystalizacyjna nigdy nie może być aktywowana przez ogrzewanie Wpływ środowiska na wyniki może być znaczący Dokładność ważenia wcześnie na wynikachMiareczkowanie Karla Fischera (KF)
Miareczkowanie Karla Fischera jest bardzo techniką oznaczania, która wykrywa i mierzy tylko wodę, w tym wodę krystalizacyjną i wodę pochłoniętą powierzchniowo. Zdecydował się na reakcję reakcji redoks z nieobecności wody i jodu w obecności zasady, dwutlenek siarki. Reakcja wodno-jodowa zależy od obecności wody, dlatego też miano odczynnika użytego w pracy ilość wody w probce, ponieważ nie ma acongo źródła wody.
Odczynnik Karla Fischera zawiera jod i po przystępym przereagowaniu z dowodami źródłowymi Jodu uzupełnienia w roztworze, zmiany koloru oraz zmianę elektrometryczną, Która mojójana w rojztóćorą w roetrjózycorą mojztóćorą w rojztóćorą moetrózycorze mojztworą mojztjorą w rojztóćorą mojztjóćorą w rojztóćorą w rojztóćorze, dowodami źródłowymi z dowodami źródłowymi Jodu. Miareczkowanie Karla Fischera mierzy ilość wody i nie ma na nie udział obecność obecność lotnych rozpuszczalników. Posiada szeroki i czuły zakres oznaczania od zawartości wody od 100% z 1 ppm.
Zalety
Zalety metody Karla Fischera to:
Specyfika dla wody Wysoka czułość do pomiaru nawet niewielkich ilości wody, jak w gazach lub niektórychach sztucznych sztucznych Szeroki zakres oznaczania wody Mierzy olej ilość wody w probce Kulometryczne oznaczanie Karla Fischera jest methodą absolutną, co oznacza, że istnieje ilościowy scena związek między prądem pobieranym do wytwarzania jodu a rybąrovki, co daje bardzo precyzyjne pomiaryNiedogodności
Ograniczenia tej metody obejmują:
Najlepiej się do płynów Ciała stałe miejsce rozpuścić w rozpuszczalniku alkoholowym, z może pali fizycznego przygotowania protbki, takie jak sproszkowanie / mielenie protbki, modyfikacja odczynnika i ogrzanie kuw Never wszystkie substancje rozpuszczają się łatwo w określonych odczynnikach Karla FischeraPorównanie LOD z miareczkowaniem Karla Fischera
Porównywalność metody LOD i KF jest ograniczona faktem, me mierzą jedno różne rzeczy różnych metodami. LOD wyprodukowano na fizycznym określeniu masy po ulotnej ulotnej wilgoci, w tym tłuszczów i wody. Miareczkowanie Karla Fischera na reakcja chemiczna dla wody w pros. Jednak w przypadku zwracane są to identyczne wartości metody, jeśli woda jest Jedyna wilgotnym składnikiem, KOLACJA w postaci łatwo uwalniająca się i jeśli Probka jest stabilna termicznie, co zapewnia uwaljianjie kiejie
LOD jest nadal kontrolowana w wielu specyfikacjach środków spożywczych, z powodów historycznych. Jednak w tych substancjach, które często są wypełnione złóżinami lotnych jednostek organicznych, tłuszczów i wody, między innymi LOD daje inne niż miareczkowanie Karla Fischera. Fałszywie wysokie wartości można znaleźć w przypadku artykułów spożywczych w porównaniu z wartościami uzyskanymi przez miareczkowanie Karla Fischera, ponieważ w temperaturech do suszenia cłęowcici.
Skład chemiczny badanej metody LOD musi być bardzo znany. Jeśli jest to hydrat, może być użycie użycia wagi bezwodnego odpowiednika. Należy wziąć pod uwagę informacje lub zaabsorbowaną wilgoci, aby uzyskać odpowiednią ilość wyposażenia, aby uzyskać wymaganą ilość bezwodnej.
Krótko mówiąc, LOD jest preferowane dla bardzo czystych prbek lub kontroli lotnych poziomów i znacznej zawartości wilgoci. Jeśli pro bka zawiera więcej niż ślady alkoholi lub innych źródeł wilgoci, oznaczania wody lepiej jest sprawdzone Karla Fischera ze wzüdu na jej specyfikę. Jeśli obecne są tylko bardzo małe ilości wody, jest to wskazanie do zastosowania miareczkowania Karla Fischera ze wωędu na jego czułość.
Źródła
Dalsze czy Anuluj
Ostatnia Aktuellizacja: 25 stycznia 2019 r
„Http://www.news-medical.net/life-sciences/Organoid-Production-Methodology.aspx” Autor Znajomości: Zrezygnowano z jej postaci w raz ze strony produkcji i funkcji, odtworzenie jej ex vivo. Ten rodzaj eksperymentu może przedstawić informacje na temat tego, jakie rodzaje komórek i sygnalizacja znaczenie dla rozwoju i funkcji lub narządu.
Plac tworzenie tkanek i installacja poza ciałem doprowadziła do powstania organoidów, które są samoorganizującymi się, trójwymiarowymi tkankami, chociaż w części reprezentacyjne częścaowe miejscaowe.
Organoidy ludzkie. Zródło zdjęcia: Meletios Verras / Shutterstock Generowanie organoidów
Organoidy można wytwarzać tekstać z pluripotencjalnych komórek macierzystych (PSC), jak i komórki macierzystych komórek (ASC). Korzystając z trójwymiarowych rusztowań, które będą odkrywać komórki komórek dla komórek i cząsteczek sygnałowych, naukowcy wykazali powstawanie samoorganizujących się muschdań. Czynniki, które należy wziąć pod uwagę podczas wzrostu komórek do niezależnych konstrukcji trójwymiarowych
rusztowania; interakcja komórka-komórka; przestrzenno-czasowa kontrola sygnalizacji; unaczynie lub ukrwienie.Rusztowania lub macierz zewnątrzkomórkowa (ECM)
Historia powiązana
ECM jest jednym z krytycznych niszy komórek macierzystych. Zapewnia wsparcie structuralne i pośredniczy w sygnalizacji różnicowania komórek. ECM obejmuje lamininę, fibronektynę i kolagen. Można symulować przy użyciu syntetycznych trójwymiarowych rusztowań o podobnej topologii lub przy użyciu odkomórkowionych, które są matrycami, z których komórki zostały zabezpieczpozandowane Tane.
Rusztowania syntetyczne
Rusztowania syntetyczne można wytwarzać z poliakryloamidu i glikolu polietylenowego (PEG) lub naturalnej cząsteczki, takie jak agaroza lub kolagen.
Rusztowania z mikrokontaktem
Poza substratu kluczową częścią ECM jest również sygnalizacja komórkowa. W tym celu opracowano wzornictwo mikrokontaktów. W tej metozie białko sygnalizacyjne, ECM i komórki są odciskane na podłożu hydrożelowym. Zaprojektowany moduł ECM powinien mieć również cechy fizyczne jak natywny ECM. W tym celu wykorzystaniaano kilka metod, takich jak wyrzutnia elektronowa, z wygenerowania cech w ECM fabúłji produkcji rodzimej.
Sztywność rusztowań
ECM zapewnia również sygnalizację mechaniczną oprócz sygnalizacji chemicznej. Zmodyfikowano sztywność, aby symulować mechaniczną sygnalizację ECM. Można tego dokonać, dodatkowe dodatkowe lub zmniejszające wiązanie w matrycy, które zwiększają lub zmniejszają jej sztywność.
Kontrola przestrzenno-czasowa
Podczas rozwoju i na krajowe są dostarczane w określonych miejscach i czasie. Ta przestrzenno-czasowa kontrola sygnalizacji jest kluczowa dla organogenezy. Kultury trójwymiarowe mają języki biochemiczne, ale nie ma kontroli nad I localizacją i czasem. Jednym ze sposobów przezwyciężenia tego jest użycie wzorców za pośrednictwem światła. W tej metozie, za pomocą światła lub fotoaktywacji, cząsteczki sygnałowe można aktywować w określonym czasie, w miejscu i za pomocą światła.
Waskularyzacja
Cechy posiadania niezbędnego substratu i sygnalizacji, innym krytycznym miejscu jest dopływ krwi i do skonstruowanych tkanek. Wewnątrz organizmu wszystkie komórki mają zapewniony dopływ krwi i port dzięki rozgałęzionej sieci naczyniowej. Zatem integracja naczyń krwionośnych z organoidem jest ostry krytycznym wymaganiem.
Wysiewanie komórek śródbłonka
Jedną z metoda jest komórki komórek śródbłonka z układu organoidalnego w wytworzenia nowych naczyń krwionośnych wraz z tkankami.
Mikro-inżynierii naczyń krwionośnych
Inną methodą jest tworzenie mikroinrii, trójwymiarowychstructowych naczyń krwionośnych w rusztowaniu organoidów. Niestandardowe wyjście tylko tyle, w procesie dyfuzji pojawiła się dopływ dopływu krwi i przerwanie.
Źródła
Dalsze czy Anuluj
Ostatnia Aktuellizacja: 26 lutego 2019 r
„Http://www.news-medical.net/life-sciences/Ptychography-in-Life-Sciences.aspx” Autor: Techniki obrazowania komórek komórek dzielają na dzielony barwników lub inżynierii genetycznej w celu barwy białek fluorescencyjnych.
Zwiększa kontrast w obrazach, mogą zakłócać aktywne komórki. Trudno jest program, czy manipulacje w świetle analizy normalnej komórki. Ptychografia przedstawia niedawno opracowaną nieinwazyjną badania komórek i culture – bez etykiet lub arteffektów.
Phasefocus Virtual Lens® to nowatorska metoda z wysokości dokładnością obrazowania ilościowego i mikoskopii. W literaturze naukowej znany jest jako „ptychografia”. Zródło zdjęcia: do skupienia metoda
W preparat świeci promień oświetlenia, za oznaczeniem umieszczona jest camera. Zarówno preparat, jak i wiązka oświetlenia są przemieszczane proporcjonalnie do siebie. Powoduje to szereg zachowań zachodzących na oświetlonych napięciem naprobce. Wzór ugiętego przez probkę dla światła oświetlanego obszaru jest rejestrowany przez kamerę, która jest kamerą ze sprzężeniem ładunkowym (CCD). CCD ułatwia konwersję z pikry na cyfry lub odwrotnie. Obraz wzoru dyfrakcyjnego jest dalej traktany za pomocą algorytmu ptychografii.